O presente trabalho consiste em uma investigação teórica e clínica acerca dos processos de alienação e separação na constituição do sujeito, a partir de uma perspectiva lacaniana. Em O Seminário, livro 11 - Os quatro conceitos fundamentais da psicanálise, Lacan introduz esses dois conceitos indicando que o sujeito surge no campo do Outro, imerso na linguagem e como efeito dessas duas operações (alienação e separação). No mesmo seminário, Lacan define o processo de análise, o tratamento analítico, em termos de alienação e separação, trabalhando o conceito de transferência dentro dessas duas direções, a partir do sujeito suposto saber, alienando o outro caracterizando a abertura do inconsciente. Na segunda operação de separação se dá o fechamento do inconsciente. Serão apresentados, através do recorte de um caso clínico, algumas considerações desses dois conceitos que puderam ser observados no início de um trabalho analítico.