No Brasil, as Infecções Hospitalares se constituem na principal causa de mortalidade de pacientes internados, gerando grandes prejuízos financeiros. Em 2008, a ANVISA publicou alerta de emergência epidemiológica devido à ocorrência de infecções por micobactérias de crescimento rápido em todas as regiões do país, infecções fortemente relacionadas a falhas nos processos de limpeza, desinfecção e esterilização de produtos médicos. A validação é uma ferramenta da metrologia que possibilita estabelecer se o processo de esterilização é executado de modo eficaz e reprodutível. Na norma ISO/TS 17665-2:2009 sobre validação da esterilização de produtos para saúde, se destacam recomendações de revalidações periódicas, distribuição espacial de sensores térmicos, critérios de aceitação quanto à temperatura calculada a partir da pressão medida na câmara e estimativa de incerteza de medição. Com base nos requisitos, recomendações, orientações e exigências descritas em documentos nacionais e internacionais, no presente trabalho se desenvolvem sistema e procedimento para avaliação da confiabilidade metrológica de esterilizadores por vapor saturado. Com o sistema foram avaliadas quatro autoclaves gravitacionais em uso hospitalar e industrial. Os resultados reforçam a importância de aspectos como: revalidações, condições ambientais e impacto da estabilidade temporal e uniformidade espacial na incerteza global das câmaras. Em todas as autoclaves avaliadas o processo se realizou por vapor superaquecido, que é menos eficiente e não-conforme à ISO 17665. As limitações identificadas corroboram com os novos requisitos da ANVISA (RDC 15:2012), tanto com relação à exigência de avaliações periódicas de esterilizadores, quanto à proibição do uso de autoclaves gravitacionais com capacidade superior a 100 L.